2022-02-26 來源：抗體密碼
在之前的文章《雙抗已火，三抗/多抗技術(shù)也已悄然出現(xiàn)》中我們介紹了目前已經(jīng)在開發(fā)的三特異抗體/多特異抗體的研究進展，其中三諾菲依據(jù)其CODV-Ig抗體技術(shù)已經(jīng)構(gòu)建多個處于臨床中的三特異抗體，包括靶向治療HIV的SAR441236（靶向結(jié)合CD4bs，V1V2多糖位和MPER表位），同時還有靶向治療腫瘤的SAR442257（CD28/CD3/CD38）和SAR443216（CD28/CD3/HER2）。
近日賽諾菲在Nature上發(fā)文詳細(xì)介紹了其三特異抗體SAR443216（CD28/CD3/HER2）的作用機制。研究表明CD28/CD3/HER2三抗不僅利用CD8T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞進行直接殺傷，而且可以利用CD4T細(xì)胞對腫瘤的生長和增值進行抑制，促進炎癥相關(guān)通路的激活，從而間接的抑制腫瘤細(xì)胞。
CD28/CD3/HER2三抗可以有效的激活T細(xì)胞
CD28/CD3/HER2的構(gòu)建采用了和CD28/CD3/CD38三抗相同的策略，即靶向腫瘤抗原的抗體采用Fab形式，而靶向激活T細(xì)胞的抗體采用了類似于scFv的形式（下圖A）。體外實驗表明，三抗中三個靶點對抗體在激活T細(xì)胞和對腫瘤殺傷方面都發(fā)揮重要的作用（下圖b-d）。
CD8和CD4T細(xì)胞在抑制腫瘤方面都發(fā)揮作用
在人源化動物模型中，CD28/CD3/HER2無論對HER高表達的腫瘤（HCC1954）還是HER2低表達的腫瘤（ZR-75-1）都具有很好的抑制效果（下圖A）。研究者離CD3，CD4和CD8細(xì)胞并接入種植HCC1954的腫瘤小鼠中，結(jié)果表明單獨的CD3或者CD4細(xì)胞可以在一定程度上抑制腫瘤的生長，而單獨的CD8細(xì)胞卻幾乎是無法抑制腫瘤生長，這可能是在缺失Th細(xì)胞的情況下，CD8細(xì)胞無法生存，因為在小鼠的外周血或者腫瘤中幾乎沒有檢測到CD8細(xì)胞（下圖b-d）。
為了進一步的研究CD4細(xì)胞在抗腫瘤中的作用，研究者將單獨的CD4細(xì)胞及CD28/CD3/HER2三特異抗體與不同類型的腫瘤孵育，之后分析這些腫瘤細(xì)胞周期，結(jié)果表明，所有腫瘤細(xì)胞的G0/G1期的比例都有較高比例的提升，這表明三特異抗體在CD4細(xì)胞的作用下可以劫持細(xì)胞處于G0/G1，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長分裂。
腫瘤基因表達變化
與CD4細(xì)胞及抗體孵育后，腫瘤細(xì)胞相關(guān)基因表達分析表明，腫瘤中與腫瘤分裂的相關(guān)基因具有明顯的下調(diào)，這和上文的結(jié)果相符合。而一些和促進炎癥的相關(guān)的基因顯著的上調(diào)，如TNF和 IFNγ等（下圖a）。因為TNF信號的上調(diào)，所以TNF下游的多個信號也顯著上調(diào)，如CXCL10, CXCL11 and CCL5等趨化因子（下圖b）。相對應(yīng)的，在腫瘤細(xì)胞和CD4及三抗孵育的實驗中也檢測到了TNF和 IFNγ等細(xì)胞因子的大量表達（下圖c）。
與之對比，腫瘤細(xì)胞和CD8細(xì)胞及抗體孵育后，與腫瘤細(xì)胞并沒有被劫持在G0/G1期，并且相關(guān)基因也沒有顯著的下調(diào)。但是在其中檢測到自然免疫基因及IFN相關(guān)基因的上調(diào)。這些分析表明，CD4和CD8T細(xì)胞對于抑制腫瘤有不同也相對獨立的作用機制。
細(xì)胞因子中和阻斷實驗表明，TNF被阻斷后，CD4對腫瘤細(xì)胞的殺傷有較大幅度的降低，而對CD8細(xì)胞的殺傷能力卻幾乎沒有影響，這表明CD4主要是通過TNF對腫瘤進行殺傷。
安全性
安全性方面，CD28/CD3/HER2抗體在非人類靈長動物中展現(xiàn)了較好的安全性，細(xì)胞因子的釋放僅在第一次用藥后出現(xiàn)，并且會快速回落。
總結(jié)
CD28/CD3/HER2是賽諾菲第二款靶向腫瘤的三特異抗體，其在利用CD3激活的T細(xì)胞的同時，利用CD28抗體形成第二信號維持激活T細(xì)胞的活性并促進T細(xì)胞形成記憶型T細(xì)胞。本文章的研究表明，除了利用CD8T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞進行直接殺傷外， CD28/CD3/HER2三抗還可以利用CD4T細(xì)胞抑制腫瘤的生長，使得腫瘤被劫持于G0/G1期；另外，CD4T細(xì)胞還可以利用獨立的機制對腫瘤細(xì)胞進行直接的殺傷，其殺傷在一定程度上依賴于TNF因子。
通過TCR復(fù)合物（信號1）激活的T細(xì)胞可以在共刺激分子（如CD28等）的作用下增強對腫瘤細(xì)胞等的清除能力，早期的技術(shù)的落后以及2006年TGN1412臨床事故導(dǎo)致了CD28相關(guān)激動型抗體研究的終止。隨著抗體技術(shù)的進步以及對CD28認(rèn)識的加深，CD28相關(guān)抗體又逐漸進入人們的視野。除了賽諾菲的CD3xCD28/TAA三特異抗體外，再生元也在研究將CD3雙抗和CD28雙抗聯(lián)合使用，并且也已經(jīng)進入臨床。
